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液相色譜儀的分離系統(tǒng)由色譜柱、色譜柱的連接部件、柱恒溫裝置和固定相等組成。一、色譜柱:液相色譜儀的色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制成,柱內(nèi)徑為1~4mm,柱長(zhǎng)為10~50cm,柱形多為直形,內(nèi)部充滿微粒固定相。近年來(lái),由于高性能填充劑的細(xì)粒化,3~5um微粒填料的使用,趨向柱內(nèi)徑為...
液相色譜儀分配系數(shù)與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù),離子交換色譜法為選擇性系數(shù)(或稱交換系數(shù)),凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來(lái)表示。高效液相色譜儀的記錄樣品通過(guò)檢測(cè)器吸光度變化引起的電信號(hào)變化,從而產(chǎn)生色譜圖,最終結(jié)果取決于后期色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的數(shù)據(jù)處理。以下是兩種常用的高效液相色譜儀數(shù)據(jù)處理方法。光譜處理后可以制作校正曲線。校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點(diǎn)。它是一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),使信息和...
高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支,以液體為流動(dòng)相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。高效液相色譜儀分析時(shí)流動(dòng)相的選擇原則:1.選擇色譜醇的溶劑作為流動(dòng)相不要隨意加滿溶劑瓶。作為分析流動(dòng)相,應(yīng)避免不必要的浪費(fèi),防止污染環(huán)境,危害身體健康。應(yīng)該根據(jù)樣哦數(shù)量,計(jì)算需要使...
中壓制備色譜是一般由泵提供壓力,壓力在5~20bar。中低壓色譜柱與常壓柱、HPLC柱有比較大的不同:在使用是是封閉的,但是可以比較方便的打開(kāi)與調(diào)節(jié)長(zhǎng)度,這與中低壓色譜常常固體上樣相適應(yīng)的。中低壓制備色譜柱的材質(zhì)主要有塑料柱、玻璃柱、不銹鋼柱三種。中壓制備色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測(cè)器、餾分收集器等,早期的中壓液相制備色譜,其輸液泵大流速可達(dá)156mL/min,并配有阻尼器,以保證液流的穩(wěn)定;進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管;檢測(cè)器有紫外和示差折光檢測(cè)器,...
制備型液相色譜儀的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)。為了縮短分離時(shí)間和提高分離效率,制備型液相色譜的的進(jìn)樣品量很大,導(dǎo)致色譜柱的分離負(fù)荷相應(yīng)加大,因此必須加大色譜柱填料,增大柱內(nèi)徑和柱長(zhǎng),使用的流動(dòng)相相對(duì)增多。然而,當(dāng)色譜柱上的樣品負(fù)載加大時(shí),往往會(huì)導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純產(chǎn)品。制備型液相色譜要解決容量與柱效之間的矛盾,對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來(lái)說(shuō),要少用填料,少用溶劑,盡可能多的得到產(chǎn)品。一、樣品的前處理:制備型液相色譜柱分離的樣品多,比分析型液相色譜柱更容易受污染,樣品...
液相色譜技術(shù)自發(fā)明以來(lái),由于其高效、高靈敏度等特點(diǎn),得到了飛速發(fā)展。近年來(lái),伴隨著生物技術(shù)和精細(xì)化工的發(fā)展,作為液相色譜分支的制備液相色譜也日益受到重視,成為了生物技術(shù)產(chǎn)品和研究中*的手段。分析色譜與制備色譜的根本區(qū)別在于分離目的不同。分析色譜,反映的是樣品的組成,追求的是高效分離和高靈敏度,不需要收集特定的餾分,洗脫液通常作為廢液來(lái)處理。但在制備色譜中,為了節(jié)省投資和操作費(fèi)用,必須以最少的時(shí)間生產(chǎn)最大量的產(chǎn)品。由于目的不同,制備色譜與分析色譜所選用的操作參數(shù),包括色譜柱尺寸...
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